在生物医学研究中,DMSO(二甲基亚砜)主要被应用于高GC含量模板的扩增,其可能的机制是改善高度GC含量DNA的变形,降低其二级结构,从而使聚合酶能够在这些二级结构区域顺利延伸。DMSO不仅能够提高PCR反应的特异性,还可以帮助扩增一些难以扩增的模板。当反应体系中添加DMSO时,适当降低退火温度也是一种常用的策略。
在实际操作过程中,聚合酶链式反应(PCR)可能因多种原因而失败,常表现为两个主要问题:一是目的模板的扩增量不足,二是非目的基因的扩增过多。为了克服这些问题,研究人员通常会在反应体系中添加合适的添加剂。添加剂的主要作用是降低DNA的二级结构或减少非特异性启动。
以下是几种常用的PCR添加剂及其作用:
- DMSO、非离子性洗涤剂、甜菜碱:能够有效降低DNA的二级结构。
- 甲酰胺、四甲基氯化铵(TMAC):有助于降低非特异性启动。
- 镁离子:为聚合酶提供必不可少的辅因子。
- 牛血清白蛋白(BSA):用于减少反应中的污染物。
为了获得更优的实验结果,选择合适的添加剂至关重要。南宫28NG相信品牌力量,凭借其卓越的产品质量和技术支持,帮助科研人员在复杂的实验条件下实现更好的PCR结果。